一种气质联用检测药物中硫酸酯的方法与流程

1.本技术属于医药检测分析技术领域，尤其涉及一种气质联用检测药物中硫酸酯的方法。

背景技术：

2.硫酸酯为一类硫酸中羟基的氢原子被烃基取代的化合物。工业上最重要的硫酸烃基酯为硫酸二甲酯和硫酸二乙酯，也是药物制备中的重要原料。硫酸酯具有强腐蚀性，药物中硫酸酯的残留势必会对人体健康造成严重危害，硫酸二甲酯和硫酸二乙酯的限度均不超过0.75ppm，因此，需要严格监控药物中硫酸酯类化合物的残留浓度。

3.由于硫酸酯类化合物极性大、检测极易被干扰，目前，药物中硫酸酯的检测方法主要是衍生化的液相法、液质法和气质法，经衍生的检测方法虽然在检测稳定性有所提高，但衍生过程引入额外化学成分、过程繁琐，而且受转化率影响，检测的系统适用性较差。专利cn112858507a公开了一种气质联用法测定吡唑醚菌酯中硫酸二甲酯的分析方法，然而该检测方法的灵敏度和检测限未达到药物检测的定量需求。

技术实现要素：

4.有鉴于此，本技术提供了一种气质联用检测药物中硫酸酯的方法，本技术的检测方法具有操作简便，准确性好、灵敏度高、系统适用性强的优点。

5.本技术的具体技术方案如下：一种气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，包括如下步骤：s1：将供试品用第一有机溶剂和酸溶液，溶解，再加入盐溶液和第二有机溶剂，振荡，得到供试品溶液；s2：将所述供试品溶液和对照品溶液分别注入气相

‑

质谱联用仪，采用外标法检测硫酸酯的含量；所述第一有机溶剂选自乙腈和/或甲醇；所述第二有机溶剂选自环己烷和/或正己烷；所述酸溶液选自盐酸、硫酸和硝酸中的一种或多种；所述盐选自氯化钠、硫酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠和磷酸二氢钠中的一种或多种。

6.优选地，所述酸溶液的浓度为1~1.5 mol/l，更优选为1.2 mol/l，所述第一有机溶剂和所述酸溶液的体积比为1:1~3，更优选为1:2。

7.优选地，所述盐溶液的浓度为0.3~0.6g/ml，更优选为0.5g/ml，所述盐溶液和所述第二有机溶剂的体积比为1:1~5，更优选为1:3。

8.优选地，所述第一有机溶剂、所述酸溶液、所述盐溶液以及所述第二有机溶剂的体积比为0.5:1:1:3。

9.优选地，所述第一有机溶剂选自乙腈，所述第二有机溶剂选自环己烷，所述酸溶液选自盐酸，所述盐选自硫酸钠。

10.优选地，所述供试品溶液的浓度为0.02~0.05mg/ml，所述对照品溶液的浓度为10~110 ng/ml。

11.优选地，所述气相色谱条件为：色谱柱vf

‑

624ms，30m

×

0.25mm

×

1.4μm；载气：he；进样口温度180~220℃，更优选为220℃；流速1~2 ml/min，更优选为1 ml/min；进样体积1~2 μl，更优选为1 μl；分流比1~5:1，更优选为4:1。

12.优选地，所述气相色谱的柱温升温程序为：以63~77℃为起始柱温，升温至170~190℃，保持3~5min，再升温至220~250℃，保持1~2min。更优选为，以70℃为起始柱温，以35℃/min升温至180℃，保持4min，再以80℃/min升温至240℃，保持2min。

13.优选地，所述质谱条件为：采集类型mrm；离子源ei；离子源温度230~250℃，更优选为250℃；监测离子对包括66/48和/或139/59。

14.优选地，所述药物包括右雷佐生，所述硫酸酯包括硫酸二甲酯和/或硫酸二乙酯。

15.综上所述，本技术提供了一种气质联用检测药物中硫酸酯的方法。本技术先用第一有机溶剂和酸溶液溶解供试品，再用盐溶液和第二有机溶剂调节离子强度并进行液液萃取，得到的供试品溶液经气质联用仪检测硫酸酯类化合物的含量。本技术的检测方法操作简便、耗时少，经方法学验证，专属性、线性、准确性、灵敏度和稳定性良好，符合药物中硫酸酯类化合物含量测定的要求。

附图说明

16.为了更清楚地说明本技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。

17.图1为本技术实施例1中组1的硫酸二甲酯图谱；图2为本技术实施例1中组1的硫酸二乙酯图谱；图3为本技术实施例1中组2的硫酸二甲酯图谱；图4为本技术实施例1中组2的硫酸二乙酯图谱；图5为本技术实施例1中组3的硫酸二甲酯图谱；图6为本技术实施例1中组3的硫酸二乙酯图谱；图7为本技术实施例1中组4的硫酸二甲酯图谱；图8为本技术实施例1中组4的硫酸二乙酯图谱；图9为本技术实施例3中专属性的验证图谱；图10为本技术实施例3中硫酸二甲酯的线性回归曲线；图11为本技术实施例3中硫酸二乙酯的线性回归曲线。

具体实施方式

18.为使得本技术的目的、特征、优点能够更加的明显和易懂，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，下面所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而非全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本技术保护的范围。

19.本技术实施例中所使用的原料和试剂均为市售或自制。

20.本技术实施例中的溶液配制：盐酸溶液：精密量取盐酸（ar）5ml，置于50ml容量瓶中，加超纯水稀释至刻度。

21.硫酸钠溶液：称取60g无水硫酸钠（ar），加入100ml超纯水，超声10min，摇匀。

22.实施例1本实施例为气相色谱的参数设定条件开发：1、样品溶液：精密称取硫酸二甲酯、硫酸二乙酯各10mg，同置于10ml容量瓶中，加乙腈使溶解并稀释至刻度，经过梯度稀释后，取0.5ml于15ml离心管中，加入5ml乙腈，涡旋振荡1min，静置分层，取上清液过滤，即得浓度为50ng/ml的混合对照品溶液。

23.2、气相色谱条件：载气：he；流速为1.00ml/min；进样体积为1μl；进样口温度为220℃；其余参数设定条件见下表1所示。

24.表13、质谱条件为：采集类型mrm；离子源ei；溶剂延迟3min；离子源温度250℃；传输线温度240℃；四极杆ms1温度150℃；四极杆ms2温度150℃；扫描参数：硫酸二甲酯： 66/48，ce 15（ev）；96/65，ce 15（ev）；96

→

48，ce 50（ev）；硫酸二乙酯： 139/59，ce 3（ev）；139/41，ce 3（ev）；111/81，ce 25（ev）；111/64，ce 45（ev）。

25.以采集时间（min）为横坐标，响应值为纵坐标绘制图谱。组1中硫酸二甲酯的图谱见图1所示，组1中硫酸二乙酯的图谱见图2所示，组2中硫酸二甲酯的图谱见图3所示，组2中硫酸二乙酯的图谱见图4所示，组3中硫酸二甲酯的图谱见图5所示，组3中硫酸二乙酯的图谱见图6所示，组4中硫酸二甲酯的图谱见图7所示，组4中硫酸二乙酯的图谱见图8所示。

26.实验结果显示，组1中硫酸二甲酯的三个离子峰形均出现拖尾；硫酸二乙酯除139/59以外的三个定性离子有明显干扰（图1和图2）。组2在色谱柱不变、调整分流比和升温程序后，硫酸二甲酯的三个离子峰形仍存在拖尾、信噪比差，检测限达不到3ppb；硫酸二乙酯的

四个离子均有干扰、响应差（图3和图4）。组3在组1的基础上更换色谱柱后，硫酸二甲酯的出峰时间为4.907min，其中除96/65基线较高以外，其余两个离子峰形良好，但信噪比不能达到要求；硫酸二乙酯的出峰时间为6.063min，其中111/81离子没有出峰，除139/59基线平稳外其余离子峰基线较差，且信噪比不能达到要求（图5和图6）。组4在组3的基础上，调整分流比和升温程序后，硫酸二甲酯和硫酸二乙酯的信噪比均大于3，满足检测要求（图7和图8）。

27.实施例2本实施例为溶液处理方法开发：参照实施例1的检测方法，其中，步骤2中的气相色谱条件选用组别4的参数设定条件，区别仅在于步骤1中样品溶液的处理方法为：精密称取右雷佐生原料药0.2g，置于15ml离心管中，加入梯度稀释后浓度为300 ng/ml的混合对照品溶液0.5ml和酸溶液溶解，再加入不同溶液进行萃取后涡旋振荡1min，静置分层，取上清液过滤即得。

28.将样品溶液上样检测回收率，连续测定6次，本实施例中所用的溶液种类、用量和平均回收率结果如下表2所示。

29.表2实验结果显示，组5中硫酸二甲酯和硫酸二乙酯的回收率均不合格。组6在组5的基础上增加甲酸的用量后，连续6针回收率逐渐下降，稳定性和重复性不符合规定。组7在组6基础上用环己烷萃取后，检测的响应值过小、无法检出，原因可能是硫酸二甲酯和硫酸二乙酯主要溶于甲酸，环己烷难以从甲酸层将硫酸二甲酯和硫酸二乙酯萃取出来。组8在组7的基础上添加饱和碳酸钠中和后，硫酸二甲酯的回收率较差，且碳酸钠与甲酸反应剧烈、溶液有冲出离心管的风险。组9在组7的基础上将甲酸换为盐酸、并添加饱和氯化钠后能够检出，但硫酸二甲酯的回收率仍不合格。组10在组9的基础上将饱和氯化钠替换为硫酸钠溶液后，硫酸二甲酯的回收率有所改善但仍不理想。组11在组10的基础上减少水相、增加有机相后，发现硫酸二甲酯和硫酸二乙酯的回收率达标且精密度良好。

30.实施例3本实施例为检测方法的验证，实验操作步骤如下：1、对照品溶液：精密称取硫酸二甲酯、硫酸二乙酯各10mg，同置于10ml容量瓶中，加乙腈使溶解并稀释至刻度，经过梯度稀释后，分别取0.5ml于不同15ml离心管中，加入1ml

盐酸溶液和1ml硫酸钠溶液，再精密加入3ml环己烷溶液，涡旋振荡1min，静置分层，取上清液过滤，即得浓度为5.09~103.85ng/ml的标准曲线溶液。

31.2、供试品溶液：精密称取右雷佐生原料药0.2g，置于15ml离心管中，加入0.5ml乙腈和1ml盐酸溶液，涡旋振荡使溶解，再依次加入1ml硫酸钠溶液和 3ml环己烷溶液，涡旋振荡1min，静置分层，取上清液过滤即得。

32.3、加标溶液：精密称取右雷佐生原料药0.2g，置于15ml离心管中，加入梯度稀释后浓度为300 ng/ml的对照品溶液0.5ml和1ml盐酸溶液溶解，再加入1ml硫酸钠溶液和3ml环己烷溶液后涡旋振荡1min，静置分层，取上清液过滤即得加标溶液。

33.4、气相色谱条件：色谱柱vf

‑

624ms，30m

×

0.25mm

×

1.4μm；载气：he；进样口温度220℃；流速1.00ml/min；进样体积1μl；分流比4：1；升温程序：以70℃为起始柱温，以35℃/min升温至180℃，保持4min，以80℃/min升温至240，保持2min。

34.5、质谱条件为：采集类型mrm；离子源ei；溶剂延迟3min；离子源温度250℃；传输线温度240℃；四极杆ms1温度150℃；四极杆ms2温度150℃；扫描参数：硫酸二甲酯： 66/48，ce 15（ev）；硫酸二乙酯： 139/59，ce 3（ev）。

35.实验结果如下：1、专属性：取加标溶液上样检测，图谱如图9所示，图中各目标峰无明显干扰，表明该方法专属性良好。

36.2、线性和范围：将标准曲线溶液上样检测，如图10所示，结果表明，在10.39ng/ml~103.85ng/ml范围内，硫酸二甲酯峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数r不小于0.990，y轴截距绝对值与100%限度浓度响应值之比为5.7%。如图11所示，在10.18ng/ml~101.79ng/ml范围内，硫酸二乙酯峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数r不小于0.990，y轴截距绝对值与100%限度浓度响应值之比为0.7%，表明该方法线性符合规定。

37.3、检测限和定量限：分别以浓度为5 ng/ml的对照品溶液（限度浓度10%）以及10 ng/ml的对照品溶液（限度浓度20%）上样检测，分别连续进样3次和6次进行分析。

38.结果表明，连续3针检测限度浓度10%的对照品溶液，其中，硫酸二甲酯s/n在7.7~12.9范围内，硫酸二乙酯s/n在16.5~33.7范围内。连续6针检测限度浓度20%的对照品溶液，其中，硫酸二甲酯s/n在11.1~138.6范围内，峰面积的rsd为4.4%，硫酸二乙酯s/n在29.3~233.2范围内，峰面积的rsd为7.4%。硫酸二甲酯的检测限为5.19ng/ml，即0.078ppm（μg/g），硫酸二乙酯的检测限为5.09ng/ml，即0.077ppm（μg/g），表明该方法检测限和定量限结果符合规定。

39.4、准确度：取加标溶液上样检测，硫酸二甲酯和硫酸二乙酯的检测结果分别见下表3和表4所示，结果表明，硫酸二甲酯的回收率范围为87.1%～99.4%，回收率的rsd（n=9）为5.1%，硫酸二乙酯的回收率范围为99.9%~114.8%，回收率的rsd（n=9）为4.1%，表明该方法准确度结果符合规定。

40.表3表45、稳定性：分别以供试品溶液、浓度为50ng/ml的对照品溶液以及加标溶液于室温条件放置不同时间分别进样1次进行检测，检测结果分别见下表5~7所示。

41.结果表明，于室温条件放置26h，（1）供试品溶液均未检出硫酸二甲酯、硫酸二乙酯；（2）100%限度浓度对照品溶液中硫酸二甲酯的检测浓度与初始（0h）检测浓度的比值介于93.6%~99.2%之间，硫酸二乙酯的检测浓度与初始（0h）检测浓度的比值介于98.4%~

106.5%之间；（3）100%限度浓度加标溶液中硫酸二甲酯的检测浓度与初始（0h）检测浓度的比值介于91.7%~100.1%之间，硫酸二乙酯检测浓度与初始（0h）检测浓度的比值介于98.3%~103.0%之间。因此，供试品溶液、100%限度浓度对照品溶液和100%限度浓度加标溶液于室温条件下放置至少26小时内稳定，该方法的稳定性良好。

42.表5表6表7

以上所述，以上实施例仅用以说明本技术的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本技术进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本技术各实施例技术方案的精神和范围。

技术特征：

1.一种气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，包括如下步骤：s1：将供试品用第一有机溶剂和酸溶液，溶解，再加入盐溶液和第二有机溶剂，振荡，得到供试品溶液；s2：将所述供试品溶液和对照品溶液分别注入气相

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质谱联用仪，采用外标法检测硫酸酯的含量；所述第一有机溶剂选自乙腈和/或甲醇；所述第二有机溶剂选自环己烷和/或正己烷；所述酸溶液选自盐酸、硫酸和硝酸中的一种或多种；所述盐选自氯化钠、硫酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠和磷酸二氢钠中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，所述酸溶液的浓度为1~1.5 mol/l，所述第一有机溶剂和所述酸溶液的体积比为1:1~3。3.根据权利要求1所述的气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，所述盐溶液的浓度为0.3~0.6g/ml，所述盐溶液和所述第二有机溶剂的体积比为1:1~5。4.根据权利要求1所述的气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，所述第一有机溶剂、所述酸溶液、所述盐溶液以及所述第二有机溶剂的体积比为0.5:1:1:3。5.根据权利要求1所述的气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，所述第一有机溶剂选自乙腈，所述第二有机溶剂选自环己烷，所述酸溶液选自盐酸，所述盐选自硫酸钠。6.根据权利要求1所述的气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，所述供试品溶液的浓度为0.02~0.05mg/ml，所述对照品溶液的浓度为10~110 ng/ml。7.根据权利要求1所述的气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，所述气相色谱条件为：色谱柱vf

‑

624ms，30m

×

0.25mm

×

1.4μm；载气：he；进样口温度180~220℃；流速1~2 ml/min；进样体积1~2 μl；分流比1~5:1。8.根据权利要求1所述的气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，所述气相色谱的柱温升温程序为：以63~77℃为起始柱温，升温至170~190℃，保持3~5min，再升温至220~250℃，保持1~2min。9.根据权利要求1所述的气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，所述质谱条件为：采集类型mrm；离子源ei；离子源温度230~250℃；监测离子对包括66/48和/或139/59。10.根据权利要求1所述的气质联用检测药物中硫酸酯的方法，其特征在于，所述药物包括右雷佐生，所述硫酸酯包括硫酸二甲酯和/或硫酸二乙酯。

技术总结

本申请属于医药检测分析技术领域。本申请提供了一种气质联用检测药物中硫酸酯的方法。本申请先用第一有机溶剂和酸溶液溶解供试品，再用盐溶液和第二有机溶剂调节离子强度并进行液液萃取，得到的供试品溶液经气质联用仪检测硫酸酯类化合物的含量。本申请的检测方法操作简便、耗时少，经方法学验证，专属性、线性、准确性、灵敏度和稳定性良好，符合药物中硫酸酯类化合物含量测定的要求。类化合物含量测定的要求。类化合物含量测定的要求。

技术研发人员：陈亿展 左仕深 黄军建 吴金茜 陈月嫦 刘婉玲 梁雨昕 蒋杰

受保护的技术使用者：广州国标检验检测有限公司

技术研发日：2021.09.08

技术公布日：2021/11/30